Kunozga Na Kukhumbikwa Kwa Nkhuku Adrenomedullin (ADM)

1. Seramu: kukhoma pa kutentha kwa chipinda kwa mphindi 10-20, kukhoma kwa mphindi 20 pa liwiro la 2000-3000 r.pm. Kuwunganya supernatant mwakupwelelera na centrifuge kachiŵiri usange vula yikuwoneka pa nyengo yakusungirako.

2. Plasma: EDTA panji sodium citrate yikwenera kusankhika kuŵa munkhwala wakukoma ndopa kuyana na ivyo vikukhumbikwa pa chinthu icho munthu wakupima. Pamanyuma pa kusakanizga kwa maminiti 10-20, centrifuge kwa maminiti 20 pa liwiro la 2000-3000 r.pm. Kuwunganya supernatant mwakupwelelera na centrifuge kachiŵiri usange vula yikupangika pa nyengo yakusungirako.

3. Mkodzo: kuwunganya na chubu chambura kubaba, kuŵika mu centrifuge kwa maminiti 20 pa liwiro la 2000-3000 r.pm. Kuwunganya supernatant mwakupwelelera na centrifuge kachiŵiri usange vula yikupangika pa nyengo yakusungirako. Maji gha mu chifuŵa na gha mu nthumbo, kukhazikiska maji gha mu wongo.

4. Selo chikhalidwe supernatant: kusonkheska na chubu chambura kubaba para mwawona vigaŵa vyakufumiska. Muŵe na mphindi 20 pa liwiro la 2000-3000 r.pm. Kuwunganya supernatant mwakupwelelera. Pakuwona vigaŵa ivyo vili mu maselo, maselo ghakuyimika ghakachepeskeka na PBS (pH 7.2-7.4), ndipo maselo ghakafika pafupifupi 1 miliyoni / mL. Kwizira mu kuzizima na kusungunuka mwakuwerezgawerezga, maselo ghakunangika ndipo vigaŵa ivyo vili mukati mwa maselo vikufumamo. Muŵe na mphindi 20 pa liwiro la 2000-3000 r.pm. Kuwunganya supernatant mwakupwelelera. Usange vula yikupangika pa nyengo yakusungirako, centrifuge kachiŵiri.

5. Chiyelezgero cha viwaro: Pamanyuma pa kudumura chiyelezgero, chipimirenge. Sakanizganipo mtengo unyake wa PBS, PH7.4. Cryopreservation mwaluŵiro mu maji gha nayitrogeni kuti ŵagwiriskirenge nchito pamanyuma. Chiyelezgero chikukhala pa kutentha kwa 2-8 degrees panyuma pa kusungunuka. Mulingo unyake wa PBS (PH7.4) ukasazgikirapo, ndipo chiyelezgero chikapangika mwakukwana na woko panji na homogenizer. Muŵe na mphindi 20 pa liwiro la 2000-3000 r.pm. Kuwunganya supernatant mwakupwelelera. Gaŵirani chimoza kuti muyezge ndipo vinyake vyose muviŵike mu firiji kuti visungike.

6. Viyezgelero vikwenera kufumiskika mwaluŵiro para vyatoleka. Kufumiska kukwenera kuchitika mwakuyana na mabuku ghakukhwaskana na nkhani iyi, ndipo kuyezgayezga kukwenera kuchitika mwaluŵiro para ŵafumiska. Usange mayeso ghangachitika yayi nyengo yeneyiyo, chiyezgelero chingasungika pa -20℃, kweni kuzizima na kusungunuka mwakuwerezgawerezga kukwenera kulekeka.

7. Tingamanya yayi sampulo iyo yili na NaN3, chifukwa NaN3 yikukanizga ntchito ya HRP.