Kusanda kwa ndondomeko na nkhani zakusazgapo masampulo gha ELISA

Mukwenera kuŵa maso kuti muleke kuŵa na hemolysis yikuru pakwamba. Hemoglobin ili na gulu la heme, ilo lili na ntchito yakuyana waka na peroxides. Ntheura, pa ELISA kusankha na HRP nga ni enzyme yakulembeka, usange hemoglobin iyo yili mu seramu njakukwana, nchakusuzga yayi kujiŵika ku chigaŵa chakukhora mu ndondomeko ya kubaba, mwakuti yichitenge na HRP substrate iyo yikusazgikira pamanyuma kuti yiŵe na mtundu. Serum sampuli zakupatulika na opareshoni ya aseptic zingasungika pa 2 ~ 8℃kwa sabata yimoza, ndipo kusunga kwakuzizima kukulimbikiskika usange mabakiteriya ghakukhwaskika. Viyezgelero vikwenera kusungika pasi pa -70℃kwa nyengo yitali. Kusonkhanitsa sampulo na kupatura seramu kukwenera kuŵikapo mtima kuti kuleke kunangika na mabakiteriya umo vingaŵira, kukura kwa mabakiteriya, kuseŵera kwake kwa ma enzyme ghanyake kungaŵa ma antigen, ma antibodies na mapulotini ghanyake ghakuvunda; Kweniso, ma enzyme ghanyake ghakupangika na mabakiteriya, nga ni -galactosidase ya Escherichia coli, ghazamupangiska kuti paŵe kunjilirapo kwambura kumanyikwa na kuyezgeka uko kuli na enzyme yakuyana. Pa nkhani ya turbidities panji flocculents ivyo vikupangika na kunangika kwa mabakiteriya pa nyengo yakusungirako viyezgelero, supernatant yikwenera kutoleka kuti yiwoneke pamanyuma pa vula ya centrifugation. Kuzizima-kusungunuka kwa viyezgelero vya seramu kukwenera kulekeka chifukwa cha kutondeka kwa magesi. Nkhongono ya kucheka kwa makina iyo yikupangika na kuzizima kwakuwerezgawerezga-kusungunuka kwa chiyelezgero yizamuparanya mapulotini na vinyake ivyo vili mu chiyelezgero, ndipo ivi vizamupangiska kuti paŵe vyakuchitika vyautesi. Kuwonjezera apo, chisamaliro chikweneraso kuŵikika pa kusakanizga viyezgelero vyakuzizima-kusungunuka, ndipo kusunkhunyika kwa nkhaza kukwenera kuchitika yayi. Kusakanizga kukwenera kuzgoka mwakuwerezgawerezga.

Mu ELISA, kanandi pali ndondomeko zitatu zakusazgirako masampulo, ndiko kuti, kusazgirako enzyme conjugate, kusazgirako substrate. Pamanyuma pa kusungunuka kwa seramu yakuzizima, mapulotini ghakuŵikika pa malo ghake ndipo ghakugaŵika mwakupambanapambana. Iwo ukwenera kusakanizgika mwakukwana, mwakuzika na kupeŵa mabubulu. Iwo ungasakanizgika mwakukhotakhota, ndipo ungasunkhunyika yayi mwa nkhongono pa chisakanizgo. Kunozga masampulo gha plasma kukukhumbikwira wovwiri wa munkhwala wakukoma ndopa, apo masampulo gha seramu ghangasangika pekha para seramu yakhoma mwachibadwa na kukhoma kwa ndopa. Diluent ingasazgikiraso ku mbuna ya mbale, ndipo pamanyuma pake seramu yikusazgikirapo, ndipo pamanyuma pake yikusunkhunyika pa micro oscillator kwa mphindi 1 kuti yiwoneseske kuti yikusakanizgika. Kanandi, masampulo gha seramu agho ghakupimika mu mazuŵa 5 ghangasungika pa 4℃C, ndipo agho ghakupimika kwakujumpha sabata yimoza ghakwenera kusungika pa aisi wakuzizima. Vinthu vyakupambanapambana vingagwiliskirika nchito kuti vimanyike na ELISA. Maji gha mu thupi (nga ni seramu), vyakufumiska (maloŵe) na vyakufumiska (nga ni msuzi, m’matumbo) vyose vingagwiliskirika nchito nga ni viyezgelero kuti vimanyike vinyake ivyo vikupangiska kuti thupi liŵe na ma antibody panji vigaŵa vinyake vya antigen. Chigaŵa cha chipangizo cha ELISA icho chikukhumbikwa yayi pa mayeso agha chikwenera kusungika mu firiji pa nyengo yake.